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NK-92MI [NK92MI]
名称
人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

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MZ-0285

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产品名称: NK-92MI [NK92MI]
商品货号: MZ-0285
中文名称: 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞
细胞数量: 1*10^6
组织来源: NK细胞;淋巴瘤;男性
细胞种属: Homo sapiens, human
细胞污染: HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
生长特性: suspension, multicell aggregates
培养基: MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
形态特征: lymphoblast
传代方法: 1:2-1:3
培养条件: Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
细胞描述: NK-92 and this derivative cell line NK-92MI have the following characteristics: surface marker positive for CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54 and CD56 bright; surface marker negative for CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34 and HLA-DR. The parental IL-2 dependent cell line is available as NK-92. NK- 92MI was shown to contain, express, and synthesize the hIL-2. A culture submitted to the ATCC in September of 1998 was found to be contaminated with mycoplasma. Progeny were cured by a 21-day treatment with BM Cycline. The cells were assayed for mycoplasma, by the Hoechst stain, PCR and the standard culture test, after a six-week period following treatment. All tests were negative. ATCC confirmed this cell line is positive for the presence of Epstein-Barr viral DNA sequences via PCR.
细胞传代步骤: 如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中
复苏细胞步骤: 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤: :待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞冻存: Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase
细胞运输: 干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输(T25细胞瓶)