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HEK293-eGFP
HEK293-eGFP
规格:
货期:
编号:MZ-8015
品牌:Mingzhoubio

活化细胞
冻存细胞
荧光标记细胞

规格:
T25瓶
冻存管

产品名称 HEK293-eGFP
商品货号 MZ-8015
中文名称 人胚肾细胞-绿色荧光蛋白标记
组织来源 人胚胎肾
生长特性 贴壁
特征特性 特别注意 该细胞贴壁不牢,运输过程中细胞会有脱落,如细胞脱落,请离心收集,消化后重新铺瓶 背景介绍 Luciferase HEK-293细胞稳定表达萤光蛋白。该细胞株性状稳定,培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤光蛋白活性检测中的阳性对照,也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。 HEK-293细胞是剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染的人胚肾细胞形成的永生化细胞,HEK-293细胞包含并表达转染的Ad5基因。早期报道中指出,293 HEK-293细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA,但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点的克隆测序发现,Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞为人类腺病毒载体扩增的宿主,可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体,由整合素β1亚单位和玻连蛋白受体α-v亚单位组成。 puro药筛浓度 HEK293-eGFP细胞puro药筛浓度为1. 0ug/ml,培养过程中可不用再添加puro,如若担心抗性随着传代时间降低,可定期用0.5ug/ml浓度puro维持
细胞污染 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养条件 90% DMEM+10% FBS+PS
传代方法 1:2至1:3,每周 2-3次
细胞冻存步骤 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤 如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冻存条件 无血清冻存液,液氮储存
姓名 手机号(微信同号) QQ
梅经理 17280875617 1438578920
胡经理 13345964880 2438244627
周经理 17757487661 1296385441
于经理 18067160830 2088210172
沈经理 19548299266 2662369050
李经理 13626845108 972239479