人结肠黏膜上皮细胞

人结肠组织

上皮细胞样

HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

RPMI-1640培养基;优质胎牛血清，10%;双抗，1%。

贴壁生长

冻存液一般为90%FBS+10%DMSO或70%基础培养基+40%FBS+5%DMSO，现用现配

Moyer,MP,Manzano,LA,Merriman,RL等人在1995年10月3日公布(1996年6月发表)NCM460细胞的建立。源自一名西班牙裔68岁男性胃癌患者的正常结肠组织。表达结肠上皮细胞相关抗原，如细胞角蛋白和绒毛蛋白，但对与其他细胞类型相关的抗原(如神经或内皮细胞)呈阴性。一些细胞对粘蛋白合成呈阳性，通过使用特殊染色剂或抗体的标准染色方法确定，群体倍增时间约为32-38小时。初步表征表明它具有正常的生长特征并且不致瘤.初步表征表明NCM460细胞不在软琼脂中生长，并且不会产生肿瘤(Moyer等，1996)。 最近主要由INCELL合作者完成的研究表明，NCM460细胞系和选定的亚群在软琼脂中生长的能力不同，显示出异常的核型并且可能是致瘤性的。这些测定中使用的确切条件和细胞密度在研究组之间不一致。然而，我们目前的解释是，作为体外选择的结果，细胞系表达了转化的表型，但保留了正常结肠上皮细胞的许多功能 方面。个别研究人员应评估这些信息和实验数据是否适合在他们的个人研究或应用中使用。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。